不同理化因子组合对长春花悬浮培养的研究

表6 不同种类培养基对对培养细胞生长的效应

培 养 基 种 类
1/4MS
1/2MS
MS
B5
White
N6

干重增加（mg/L）
9776
12526
10294
11328
8310
死亡

生长速度（mg/Ld）
392
501
412
454
333
——


由表6可以看出1/2MS、MS和B5培养基对细胞的生长比较适合。而在N6培养基中细胞全部死亡。在不同培养基中的细胞生长的速度情况不同是由于作为氮源的状态不同，含量不同所造成的。

（2）不同蔗糖浓度对细胞生长的效应

表7 不同蔗糖浓度对细胞生长的效应

不同蔗糖浓度（g/L）
0
10
20
30
40
50

干重增加（mg/L）
死亡
2587
5278
10294
9775
7829

生长速度（mg/Ld）
——
104
212
412
391
314


由表7可以看出，在MS培养基中，随着蔗糖浓度的升高，生长速度逐渐增大，说明在低浓度时，糖是细胞生长的限制性基质〔7〕。甘焕远等〔8〕在总结前人和自己的工作的基础上提出了培养基中蔗糖常常是使培养物生长达到最高的碳源。同时还发现随着糖浓度的增加会导致干重的增加，而细胞数量并不显著增加[9]。实验也证明了蔗糖的浓度为30g/L时，细胞生长最快。低于或高于此浓度，其细胞生长速度都将下降。

（3）不同葡萄糖浓度对细胞生长的效应

表8 不同葡萄糖浓度对细胞生长的效应

不同葡萄糖浓度（g/L）
0
10
20
30
40
50

干重增加（mg/L）
死亡
2150
4415
6040
7281
8801

生长速度（mg/Ld）
——
87
177
242
292
353


由表8和上面两个示意图可以看出，在MS培养基中，在实验所研究的范围内，随着葡萄糖浓度的升高，细胞生长速率随之增加。而且较之于蔗糖相比，增长更明显。此外还发现葡萄糖下的愈伤组织比蔗糖下的要疏松、均匀而且细小颗粒多。

（4）不同PH值对细胞生长的效应

表9 不同PH值对细胞生长的效应

不同PH值
3.8
4.2
4.6
5.0
5.4
5.8
6.2
6.6

干重增加（mg/L）
4734
5948
8597
12808
16741
10294
7224
4636

生长速度（mg/Ld）
190
238
344
513
550
412
289
186


由表9和上面两个示意图可以看出：PH值对细胞的生长影响十分明显。在研究范围内PH值在5.0-5.4时最适于长春花细胞的生长。PH值过大或过小都对愈伤组织的生长产生明显的抑制，在整个实验过程中培养基的PH值在小范围内呈先降低后升高的变化趋势[10]，这种变化趋势主要是由于NO3-和NH4+之间供应和吸收的不平衡[11]。在研究范围内的最适PH值为5.4。

四、结论

从以上的实验部分可以看出：不同的理化因子对长春花培养细胞有不同的影响。其中植物生长调节物质是培养基中的关键物质，对植物细胞培养起着重要而明显的调节作用，本实验的结果也得到了验证。植物生长调节物质的种类以及浓度对不同的植物有着不同的效果。在长春花细胞的悬浮培养中，组合因子比单因子更有利于细胞的生长，以0.5mg/L NAA+0.5mg/L 2,4-D+2.0mg/L 6-BA效果最佳，细胞生长速度最快。从结果可以看出不是植物生长调节物质的浓度越高、种类越多效果就越明显。对不同的植物应选择相应的种类和适宜的浓度。另外，不同的培养基在长春花细胞的悬浮培养中也有不同的效果。这主要是由于培养基的组分不同。其中1/2MS、MS和B5这三种培养基较有利于细胞的生长。这可能是由于这三种培养基中的氮元素相对于其他的培养要少一些的原因，而更有利于长春花细胞的生长。蔗糖和葡萄糖是培养基中碳素和能量物质的来源。同时对保持培养基的渗透压也有重要的作用。但在培养基中糖的含量不宜过高，一般在2-4%为宜。PH值是细胞培养的重要的外界环境，对细胞的生长起着重要的作用，不宜过高也不宜过低，本实验研究的长春花的最适PH值为5.0-5.4。



参考文献

[1] 江苏新医学院．中药大词典[M]．上海.上海科学技术出版社．1997．

[2] 季宇彬．中药有效成分药理与应用[M]．哈尔滨.黑龙江科学技术出版社．

[3] W巴尔茨．E赖因哈德．MH芩克 植物组织培养及其在生物技术上的应用[M]．北京：科学出版社，1983，1~10．

[4] 宋思扬，楼士林．生物技术概论[M]．北京：科学出版社，1996，61~80．

[5] 陈因良，陈志宏．细胞培养工程[M]．上海：华东化工学院出版社，1992，251~253．

[6] 刘庆昌，吴国良．植物细胞组织培养．北京.中国农业大学出版社．

]7] 陈薇等.菘蓝下胚轴愈伤组织细胞悬浮培养[J]．西南农业大学学报．2002.24（2）105-107．

[8] 高向阳等．几种营养物质对烟草细胞生长和CoQ10含量的影响[J]．生物工程学报．2001.1 （16）.78-81．

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