盐酸塔斯品碱促进大鼠皮肤创伤愈合及其作用机制的研究
2.5创面组织学检查
2.5.1HE染色观察 创伤后第3天，TA/HCl组和bFGF组均有明显的单核细胞渗出，伴有成纤维细胞和毛细血管的增生；而模型组中空白对照组和DMSO对照组坏死组织未清除，有少量单核细胞渗出，有散在的成纤维细胞形成。创伤后第7天，TA/HCl组和bFGF对照组伤口周围表皮细胞开始向伤口方向延伸蔓延，皮下成纤维细胞生长活跃，数量多，其毛细血管胚芽数量显著多于模型组（P<0.05或P<0.01），胶原纤维含量也明显增加，见图4。创伤后第14天，TA/HCl组和bFGF对照组表皮细胞继续生长逐渐覆盖伤口，肉芽组织生长旺盛，可见周围上皮细胞延伸生长、新生血管网、神经末梢及修复后的表皮细胞；而模型组中空白对照组和DMSO对照组则有较多肉芽组织生长，胶原开始形成。创伤后第21天，TA/HCl组和bFGF对照组皮下及肌层均有大量纤维母细胞增生，血管减少，创口消失，新生皮肤附属器开始形成，创面已基本愈合；模型组中空白对照组和DMSO对照组创口亦消失，但胶原纤维数量相对较少。见图5。
2.5.2电镜观察结果 创伤后第7天，TA/HCl 2 mg/ml组创面肉芽组织中可见大量成纤维细胞，胞体大，核内染色质分布均匀，核仁明显，胞浆内有丰富的粗面内质网，内质网池轻度扩张，池内含有均匀的低电子密度物质，说明蛋白质、基质等合成旺盛，细胞处于功能旺盛状态；细胞周围可见到大量的胶原纤维，成纤维细胞间还可见新生的毛细血管，其内皮细胞较厚，略呈扁平状。bFGF对照组与TA/HCl组基本相同。模型组创伤后第7天，电镜下见皮肤组织内细胞排列紊乱，未见完整的皮肤组织，可见大量炎细胞及坏死或凋亡的细胞，成纤维细胞坏死、凋亡，细胞结构不清晰。见图6。
图2 各组创伤大鼠不同修复期肉芽组织中蛋白质含量的变化 （n＝5）（略）
Fig 2 Contents of protein in granulation tissues of skin wounds in different healing periods (n＝5)
图3 各组创伤大鼠不同修复期肉芽组织中Hyp含量的变化 （n＝5）（略）
Fig 3 Contents of Hyp in granulation tissues of skin wounds in different healing periods (n＝5)
图4 各组创伤大鼠不同修复期肉芽组织中新生毛细血管数量 （n＝5）（略）
Fig 4 Numbers of newly born capillaries in granulation tissues of skin wounds in different healing periods (n＝5)
图5 创伤后第7天创面肉芽组织生长情况 （HE染色，×200）（略）
Fig 5 Histopathological characteristics of granulation tissues of skin wounds on the 7th day after wounding (HE staining, ×200)
A: Model group; B: TA/HCltreated group (2 mg/ml)
图6 创伤后第7天创面肉芽组织超微结构（×5000）（略）
Fig 6 Superstructure of granulation tissues in skin wounds on the 7th day after wounding tested by electron microscope (×5000)
A: Model group; B: TA/HCltreated group (2 mg/ml)
3讨论
创伤愈合是一个复杂的病理过程，可分为三个重要重叠阶段：炎症反应期、肉芽组织形成期及改建期，而最关键的步骤是肉芽组织形成期。肉芽组织数量的多少和质量的好坏直接影响着创面的修复愈合程度及其预后。因此，通过检测肉芽组织内蛋白质的含量及新生毛细血管数量，可以初步估计出组织的生长情况［17］。本实验结果表明：在创伤后早期（第3～7天），TA/HCl 2 mg/ml组和bFGF对照组肉芽组织内蛋白质的含量明显高于模型组；TA/HCl（2 mg/ml、1 mg/ml）组和bFGF组毛细血管胚芽数量明显多于模型组。由此说明：一定剂量的TA/HCl在创伤早期可促进肉芽组织内蛋白质的合成和新生毛细血管的形成。
胶原是创伤愈合过程中不可缺少的重要成分［18,19］，Hyp是胶原的主要成分之一，在胶原中约占12.5%［20］，测定Hyp的含量可间接反映胶原的含量，可作为创伤修复的一项指标。本实验结果表明：在创伤修复中、后期，TA/HCl各剂量组和bFGF对照组Hyp含量均高于模型组；第14天时，Hyp含量达到峰值，表明新生胶原合成旺盛，说明TA/HCl可促进创伤组织中胶原的合成和累积，但是否会形成瘢痕增生，有待进一步的研究。
在创伤修复过程中，bFGF可以影响创伤修复的整个过程。内源性bFGF在创面局部通过复杂的调节过程促进创面愈合。外源性bFGF可刺激组织分泌bFGF，也可直接刺激成纤维细胞及细胞外基质的合成，形成胶原纤维；另一方面，bFGF与相应的受体结合后，可诱导内皮细胞的迁移、毛细血管的增生，促进成纤维细胞增殖，使肉芽组织迅速生长，加速受创组织再上皮化，从而完成皮肤的修复过程［8］。本实验结果表明：在创伤局部应用TA/HCl，可促进创伤愈合早期肉芽组织中蛋白质和毛细血管的形成，而中、后期则表现为刺激Hyp和胶原的合成，具有明显促进皮肤创伤愈合的作用。TA/HCl是否通过促进内源性bFGF的表达而产生作用，有待作进一步的研究。
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