沙棘粉对衰老模型小鼠脑组织MDA和GSH含量的影响及其抗疲劳效果的研究
作者:陈轶玉,乔慧,陆培培,黄成
【摘要】 采用昆明小鼠为实验对象，通过饲喂不同比例的沙棘粉饲料4周以后，在抗疲劳实验中，以血清乳酸脱氢酶(LDH)活力、血乳酸(BLA)、肌糖原(MG)、肝糖原(LG)等4个生理参数为指标观察沙棘粉的抗疲劳效应，结果表明，饲喂4周沙棘粉剂的小鼠，其LDH、LG含量均显著高于对照组；其抗疲劳时间亦显著增长，且抗疲劳实验30min和60min后的血乳酸水平均低于对照组。在检测小鼠脑组织的MDA和GSH含量时发现4％～6％剂量沙棘粉能降低MDA含量，提高GSH含量，表明沙棘粉能拮抗D-半乳糖的损伤，达到维生素相同效果。
【关键词】 沙棘粉；衰老小鼠；脑组织氧化还原物质；抗疲劳效果
沙棘制品不仅可以作为饵料中的维生素源，还可制成供人类食用的产品。沙棘果享有“维生素仓库”和“神秘果”之称，沙棘果中含有丰富的生物活性物质，具有祛痰、利肺、养胃、健脾等功效，对心血管系统、免疫系统、抗肿瘤、抗衰老、抗炎、抗辐射损伤等方面均有显著的药理效应［1］。可以预见，沙棘制品的市场前景十分可观，而目前我国沙棘资源浪费严重。因此开发利用此资源已迫在眉睫。西部地区政府及种植户迫切希望高等学校、科研院所开展沙棘资源开发利用的研究，本实验采用沙棘果的干粉作为实验材料，通过饲喂昆明鼠4周以后，进行其抗疲劳效果的研究，为沙棘资源开发利用提供基础性实验参数。
1 材料与方法
1.1 动物来源及实验场所 实验动物选自南京安立默实验动物繁殖调剂中心（许可证号SYXK 2002-0059）， 在分组前选用了出生日龄（4周龄）及体重都基本相同的昆明小鼠（雄性）；实验场所为南京大学药业有限公司动物房（许可证号SCXK2002-0016）。
1.2 实验分组 取小白鼠147只，随机分成7个大组，每组均为21只，组1作为饲喂添加复合维生素的对照组，组2作为饲喂无复合维生素饲料的空白对照组，组3～组7作为饲喂添加比例不同的沙棘粉饲料实验组，小鼠均单笼饲养4周。
1.3 饲喂剂量及配方 每日投喂足量饲料和水，各组饲料配方如表1。
表1 各组配方成分表 （%）
1.4 LDH活力、BLA、MG、LG含量测试 抗疲劳实验前，从每组取小鼠3只，眼眶放血制血清送检，测试乳酸脱氢酶（LDH）活力、肌糖原（MG）和肝糖原（LG），LDH活力，参数King氏法测定［2］。
1.5 抗疲劳实验 抗疲劳试验依陈奇方法［3］，将饲喂4周的小组分别取12只按小鼠体重10%负重砝码，于水温25～27℃、40cm深、直径为20cm的标本瓶中游泳，进行抗疲劳试验。待其头部没入水下5秒时迅速捞起，记录游泳时间，待其恢复30min后各取6只眼眶放血，制备血清，待送检测试BLA，各组剩余6只待其恢复60min后再眼眶放血，制血浆送检测试BLA。
考虑到在对每一只鼠的每一次取血操作时，对动物造成不同程度伤害性刺激，由此引起的抗疲劳强度无法保持一致，故而设计成每一个实验测定都分批取样，进行一次性采血。
1.6 小鼠脑组织MDA、GSH含量 取饲喂4周的小鼠，每组6只，断颈处死，迅速取出大脑，用冰冷的PBS缓冲液制备10%脑匀浆，离心后取上清液进行MDA和GSH含量测定。测定步骤按试剂盒说明书进行，MDA、GSH测定试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。
2 结果
2.1 饲喂4周后各组小鼠LDH活力、MG、LG与BLA值 见表2。饲喂4周后各组小鼠血液指标初始值，各组取6只小鼠眼眶测试MG、LG、BLA和LDH，因这批动物取自抗疲劳动物之前，故称为初始数值，表2为测试结果。
表2 各组小鼠LDH活力、MG、LG与BLA初始值 (x±s)
注：表中不同组的相同指标中，*表示差异有显著性；**表示差异有非常显著性
由表2统计分析结果可知，g3～g5沙棘粉组的小白鼠，其MG和LG含量均显著大于空白组(P<0.01)，其中维生素组也显著大于空白组(P<0.01)；BLA含量各组差异无显著性；g4～g5沙棘粉组和维生素组的LDH活力均显著大于空白组（P<0.01)，说明4%～6%沙棘粉在提高小鼠的LDH活力方面达到维生素对照组效果。g6～g7组变化不显著，说明8%～10%沙棘粉的效果不明显。
2.2 抗疲劳及血乳酸指标 各组随机取12只鼠，做抗疲劳实验，于其休息30min、60min两个阶段各取6只放血制血清测试BLA含量，各组的实验数据进行均数差显著性检验，统计结果见表3。
表3 抗疲劳时间、30min与60min的BLA数值及其均数差检验 (x±s)
注：*表示差异有显著性；**表示差异有非常显著性
由表3测试结果可推算：饲喂2%～6%沙棘粉的小白鼠抗疲劳时间比对照组延长1.17～3.64min，且差异有非常显著性（P<0.01)；与维生素组相比，不达显著性，但维生素组的抗疲劳时间比空白对照组延长3.36min，且差异有非常显著性（P<0.01)；抗疲劳运动后30min和60min血乳酸含量4%～6%组和维生素组，与对照组相比，差异有非常显著性（P<0.01)。
