几种水溶性维生素对小鼠腹腔巨噬细胞活性的作用
出处：论文网
时间：2007-06-14
【摘要】 目的 探索研究几种水溶性维生素（VitB1、VitB6、VitB12 and VitC）对小鼠腹腔巨噬细胞活性的作用。方法 采用改良的MTT法，来检测小鼠腹腔巨噬细胞活性。结果 VitB1 50μl (0.0025μg), VitB6 200μl (0.002μg), VitB12 200μl (0.002μg), VitC 200μl(0.08μg)均对小鼠腹腔巨噬细胞有活性增强作用。结论 几种水溶性维生素（VitB1、VitB6、VitB12 and VitC）对小鼠腹腔巨噬细胞活性有增强作用。
【关键词】 水溶性维生素；MTT法；小鼠巨噬细胞
To study the activation of in vitro mice macrophages with various water soluble vitamins
【Abstract】 Objective To propose studying the effect of various water soluble vitamins ( VitB1,VitB6,VitB12 and VitC ) of in vitro mice macrophages activation. Methods The article took the modified method of MTT to explose the activation of in vitro mrice macrophages. Results VitB150μl (0.0025μg), VitB6 200μl (0.002μg), VitB12 200μl (0.002μg), VitC 200μl(0.08μg) all stimulated the effect of in vitro mice macrophages. Conclusion Various water soluble vitamins( VitB1,VitB6,VitB12 and VitC )which were able to stimulate the activation of in vitro mice macrophages under certain concentration.
【Key words】 water soluble vitamin; MTT method; mice macrophage
维生素是维持人体正常生理功能及细胞内各种能量代谢生化反应所必需的一类低分子量有机化合物。尽管机体对这类物质需求量相对很少，但是它们却十分重要，是人体必不可少的微量物质，如果缺乏，可引起各种各样的疾病。因此某些种类维生素对人体的免疫系统的免疫功能也起着重要作用，影响免疫系统的各种细胞功能。最近许多年，国内外营养免疫学者都在研究探讨各种维生素对免疫系统的作用，企图探明各种维生素对免疫细胞活化的增强或抑制，为提高机体免疫力，本文选用和人类基因组具有相当部分同源性小鼠，选用 体外实验检测维生素B1、B6、B12和维生素C对小鼠腹腔巨噬细胞活性作用的研究。 Mosmon(1983)［1］报道噻唑蓝（MTT）比色法，经后人改良，使这种方法更加完善成熟，成为定量、重复性好、简便易行检测免疫细胞活性的好方法。我们采用此法，检测小鼠腹腔巨噬细胞的活性，现将结果报告如下。
1 材料与方法
1．1 实验动物和主要试剂及实验仪器 ICR小鼠体重（20±2）g，雄性，由首都医科大学实验动物部提供。RPMI1640培养液为Hyclmone公司产品。噻唑蓝（MTT）为Sigma公司产品，10%十二烷基磺酸钠（SDS）为BRL公司产品，淋巴细胞分离液为TBD生物技术发展中心产品，液体石蜡油为北京旭东化工厂产品， VitB1 （5mg/ ml）、VitB6 （5mg/ ml）、VitB12 （0.5mg/ ml）均为天津金耀氨基酸有限公司产品， VitC（400mg/ ml）为北京双鹤药业有限公司产品，酶标仪为SLT公司产品（型号为A-5082）。
1.2 方法 （1）对小鼠腹腔注射（VitB1 、VitB6 、VitB12 和VitC，无菌液体石蜡油），取ICR小鼠40只分成4组，每组10只，分别为1组、2组、3组和4组。1组为VitB1实验组，第1天对其中5只小鼠腹腔注射无菌生理盐水 0.2ml/只，作为对照，另外5只小鼠腹腔注射VitB1 0.05ml/只作为实验组。2组为VitB6 实验组，第1天对其中5只小鼠腹腔注射无菌生理盐水 0.2ml/只，作为对照，另外5只小鼠腹腔注射VitB6 0.2ml/只作为实验组。3组为VitB12 实验组，第1天对其中5只小鼠腹腔注射无菌生理盐水 0.2ml/只，作为对照，另外5只小鼠腹腔注射VitB120.2ml /只作为实验组。4组为VitC 实验组，第1天对其中5只小鼠腹腔注射无菌生理盐水 0.2ml /只，作为对照，另外5只小鼠腹腔注射VitC 0.2ml/只作为实验组。以上4组小白鼠经腹腔注射生理盐水和维生素，均于48h后再经腹腔注射无菌液体石蜡油0.1ml /只。48h后行颈椎脱臼处死。（2）巨噬细胞的制备：将处死的小白鼠行腹部皮肤消毒后，持镊提起腹中部皮肤并剪开，暴露腹膜，避开血管剪开腹膜一小口。用毛细吸管取出腹腔液，并收集于试管中。作好标记后离心，弃上清，洗3次，立即进行台盼蓝染色，计算活细胞数。细胞数108/ ml。（3）噻唑蓝比色法，将制备的小鼠巨噬细胞按组分管，每组实验管（孔）3管（孔）对照管（孔）3管（孔）。37℃温育2h后，每管加10%SDS（溶于双蒸水），轻轻震荡，待甲簪颗粒完全释放后，再用酶标仪测OD570值。
2 结果
【关键词】 水溶性维生素；MTT法；小鼠巨噬细胞
To study the activation of in vitro mice macrophages with various water soluble vitamins
【Abstract】 Objective To propose studying the effect of various water soluble vitamins ( VitB1,VitB6,VitB12 and VitC ) of in vitro mice macrophages activation. Methods The article took the modified method of MTT to explose the activation of in vitro mrice macrophages. Results VitB150μl (0.0025μg), VitB6 200μl (0.002μg), VitB12 200μl (0.002μg), VitC 200μl(0.08μg) all stimulated the effect of in vitro mice macrophages. Conclusion Various water soluble vitamins( VitB1,VitB6,VitB12 and VitC )which were able to stimulate the activation of in vitro mice macrophages under certain concentration.
【Key words】 water soluble vitamin; MTT method; mice macrophage
维生素是维持人体正常生理功能及细胞内各种能量代谢生化反应所必需的一类低分子量有机化合物。尽管机体对这类物质需求量相对很少，但是它们却十分重要，是人体必不可少的微量物质，如果缺乏，可引起各种各样的疾病。因此某些种类维生素对人体的免疫系统的免疫功能也起着重要作用，影响免疫系统的各种细胞功能。最近许多年，国内外营养免疫学者都在研究探讨各种维生素对免疫系统的作用，企图探明各种维生素对免疫细胞活化的增强或抑制，为提高机体免疫力，本文选用和人类基因组具有相当部分同源性小鼠，选用 体外实验检测维生素B1、B6、B12和维生素C对小鼠腹腔巨噬细胞活性作用的研究。 Mosmon(1983)［1］报道噻唑蓝（MTT）比色法，经后人改良，使这种方法更加完善成熟，成为定量、重复性好、简便易行检测免疫细胞活性的好方法。我们采用此法，检测小鼠腹腔巨噬细胞的活性，现将结果报告如下。
1 材料与方法
1．1 实验动物和主要试剂及实验仪器 ICR小鼠体重（20±2）g，雄性，由首都医科大学实验动物部提供。RPMI1640培养液为Hyclmone公司产品。噻唑蓝（MTT）为Sigma公司产品，10%十二烷基磺酸钠（SDS）为BRL公司产品，淋巴细胞分离液为TBD生物技术发展中心产品，液体石蜡油为北京旭东化工厂产品， VitB1 （5mg/ ml）、VitB6 （5mg/ ml）、VitB12 （0.5mg/ ml）均为天津金耀氨基酸有限公司产品， VitC（400mg/ ml）为北京双鹤药业有限公司产品，酶标仪为SLT公司产品（型号为A-5082）。
1.2 方法 （1）对小鼠腹腔注射（VitB1 、VitB6 、VitB12 和VitC，无菌液体石蜡油），取ICR小鼠40只分成4组，每组10只，分别为1组、2组、3组和4组。1组为VitB1实验组，第1天对其中5只小鼠腹腔注射无菌生理盐水 0.2ml/只，作为对照，另外5只小鼠腹腔注射VitB1 0.05ml/只作为实验组。2组为VitB6 实验组，第1天对其中5只小鼠腹腔注射无菌生理盐水 0.2ml/只，作为对照，另外5只小鼠腹腔注射VitB6 0.2ml/只作为实验组。3组为VitB12 实验组，第1天对其中5只小鼠腹腔注射无菌生理盐水 0.2ml/只，作为对照，另外5只小鼠腹腔注射VitB120.2ml /只作为实验组。4组为VitC 实验组，第1天对其中5只小鼠腹腔注射无菌生理盐水 0.2ml /只，作为对照，另外5只小鼠腹腔注射VitC 0.2ml/只作为实验组。以上4组小白鼠经腹腔注射生理盐水和维生素，均于48h后再经腹腔注射无菌液体石蜡油0.1ml /只。48h后行颈椎脱臼处死。（2）巨噬细胞的制备：将处死的小白鼠行腹部皮肤消毒后，持镊提起腹中部皮肤并剪开，暴露腹膜，避开血管剪开腹膜一小口。用毛细吸管取出腹腔液，并收集于试管中。作好标记后离心，弃上清，洗3次，立即进行台盼蓝染色，计算活细胞数。细胞数108/ ml。（3）噻唑蓝比色法，将制备的小鼠巨噬细胞按组分管，每组实验管（孔）3管（孔）对照管（孔）3管（孔）。37℃温育2h后，每管加10%SDS（溶于双蒸水），轻轻震荡，待甲簪颗粒完全释放后，再用酶标仪测OD570值。
2 结果
2.1 VitB1对小鼠腹腔巨噬细胞活性的作用 VitB1对小鼠腹腔巨噬细胞活性的作用，VitB150μl（0.0025μg）对小鼠腹腔巨噬细胞活性有增 强作用，P<0.01，见图1。
图1 Vit B1对小鼠巨噬细胞活性的作用（略）
2.2 VitB6对小鼠腹腔巨噬细胞活性的作用 VitB6对小鼠腹腔巨噬细胞活性的作用, VitB6200μl(0.002μg）对小鼠腹腔巨噬细胞活性有增强作用，P<0.01，见图2。
图2 Vit B6对小鼠巨噬细胞活性的作用（略）
2.3 VitB12对小鼠腹腔巨噬细胞活性的作用 VitB12对小鼠腹腔巨噬细胞活性的作用，200μl(0.002μg)对小鼠腹腔巨噬细胞活性有增强作用，P<0.001，见图3。
