甲基强的松龙对深低温停循环大鼠脑保护作用的研究
2.2 脑组织电镜超微结构观察
DHCA模型组和MP处理组大鼠脑组织在DH-CA后6 h脑组织超微结构未见明显区别，基本正常; DHCA 后1 d模型组出现神经胶质细胞凋亡（图1），MP处理组未见明显异常（图2）。
3 讨 论
NMDAR是中枢神经系统内一类重要的EAA受体，广泛存在于中枢和外周神经系统。NMDA受体由NR1、NR2、NR3A三部分组成。对NMDA受体来说NR1是不变的［2］，它是NMDAR药理学和电生理学特 性的基础，而NR2A、B、C、D亚型单独存在时并不表现受体活性，只是在与NMDAR1结合后决定离子通道开放的时间，并调节受体兴奋剂及拮抗剂的作用。因此，DHCA再灌注后脑NMDAR1表达的变化即可反映NMDAR在DHCA再灌注后的变化。DHCA对大脑的损伤机制有许多假说，其中Kris-tian等［3］认为EAA在DHCA脑损伤中起主要作用，DHCA期间，脑组织缺血缺氧导致突触前EAA大量释放和再摄取减少，从而激活突触后NMDA和AM-PA受体，使位于离子通道内起阻断作用的镁离子释放，NMDA 受体介导的钙通道及电压敏感的钙通道开放。一方面使Ca2+、Na+、水进入细胞内，K+大量流出 细胞膜，引起水钠潴留导致神经元急性肿胀坏死;另一方面钙离子大量内流导致细胞内钙超载，钙离子激活一系列与细胞毒性有关的酶，如蛋白激酶C、磷脂酶等，经过这些酶的共同作用，最终引发神经细胞膜降解、细胞骨架解体、DNA 断裂，直至细胞死亡。 MP脑保护作用机制复杂，包括抗炎、阻断氧自由基诱导的脂质过氧化、维持组织血流量和有氧能量代谢等。Langley等［4］研究发现MP处理组DHCA后大脑氧代谢率、脑血流量明显高于对照组，表明DHCA前MP预处理能有效地保护脑组织。Baumgartner等［5］通过以狗为模型DHCA2 h后，发现谷氨酸等兴奋性氨基酸大量释放引起较严重的脑损害。较多研究表明，MP对DHCA大脑具有保护作用，但并没有探讨其保护机制［4，6］。大量研究表明，具有神经保护作用的干预方法不仅可以减轻脑缺血再灌注病理损伤过程，同时可使NMDAR的表达下调。本研究发现，DHCA模型组大鼠脑NMDAR1蛋白表达从再灌注2 h起开始升高，于24 h到达高峰，其机制可能是DHCA后脑释放大量谷氨酸作用于突触后膜NMDAR1的谷氨酸结合位点，使神经细胞处于兴奋状态，NMDA受体转录和翻译活性增大，对表达起上调作用。另外在DHCA再灌注后期NMDAR1表达明显降低，其机制可能与早期细胞坏死和凋亡、细胞功能被抑制、健存细胞大量减少以及NMDAR基因转录和翻译功能下降等因素有关;也可能与受体内化有关。大鼠DHCA后脑组织 因缺血释放大量谷氨酸，致NMDAR1过度激活，使大量NMDAR1发生内化，其结果不仅增加了NMDAR1自身的代谢过程，减少胞膜表面NMDAR1的密度，同时还可能发挥某种信号作用（包括下调NMDAR mR-NA 的转录）［7］。
另外，在DHCA后2、6、12 h，1、2 d 5个时间点，MP处理组大鼠脑NMDAR1蛋白表达明显低于DHCA模型组，说明MP能明显抑制DHCA后脑NMDAR1蛋白的表达，减少NMDA受体介导的钙通道开放，从而起到脑保护作用。从组织超微结构发现，DHCA模型组和MP处理组大鼠在DHCA后6 h脑组织超微结构未见明显区别，属基本正常;DHCA 后24 h模型组大鼠脑组织出现神经胶质细胞凋亡，MP处理组未见异常，说明MP能明显抑制DHCA后脑细胞凋亡，起到脑保护作用。基于已有的实验结果推测，MP对DHCA的脑保护作用机制可能是通过多途径实现的，并不能仅用单纯抑制NMDAR1 蛋白表达解释，或许还与其他非NMDA 受体有关系。另外本研究结果仅仅提示MP可能是通过调控EAA NMDAR1 Ca2+通路而产生脑保护作用，但是其对NMDAR1的抑制作用是直接作用于NMDAR1还是通过其他途径间接影响NMDAR1，这些问题还有待于更进一步的研究。
【参考文献】
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［5］Baumgartner W A，Wallins P L，Salazar J D，et al.Assessing the impact of cerebral injury after cardiac surgery:will deter-mining the mechanism reduce this injury ［J］.Ann Thorac Surg，1999，67（6）:1871-1873，1891-1894.
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