氟西汀对海马神经元生长的影响
3 讨 论
本实验严格控制胰酶的量和消化时间，采用了0.25%胰蛋白酶低浓度溶液、30 min长时间消化的方法，尽可能减少分离过程中的化学损伤。为了避免操作过程中的机械损伤，分离时动作轻柔，规律换药，每72 h半量换液1次，换液时速度快，以减少对神经元生长的影响。本实验采用了差速贴壁生长，去除了成纤维细胞，并采用B27无血清培养基，可以选择性地促使神经元生长，抑制非神经元的生长和繁殖［3］，从而可以纯化海马神经元。NSE是神经元分化成熟的特异性 标志酶之一，它主要表达于神经元的胞体、轴突、树突部分［4］，通过NSE免疫细胞化学染色方法，可以鉴定体外培养的新生大鼠海马神经元及其纯度。本实验通过NSE免疫化学染色，发现大部分细胞胞浆和突起被染成棕黄色，计数阳性细胞百分率为90%。尼氏体是神经元的特征性结构之一，存在于神经元胞体和树突内，可被碱性染料染成深色的颗粒和斑块，它是细胞内的一种蛋白质合成装置，可作为观察神经细胞功能状态的灵敏指标。本实验观察到培养的海马神经元胞质内尼氏体数量较多，说明培养的海马神经细胞生长良好。NSE免疫细胞化学染色和尼氏染色结果提示，本实验能培养出纯度较高、生长良好的海马神经元。氟西汀不仅是广泛应用的抗抑郁药，而且可以用 于治疗癫痫、偏头痛、认知障碍、焦虑障碍、儿童孤独症等诸多神经精神疾病。目前研究认为，氟西汀抗抑郁效应与它对海马的神经保护作用有关，这种作用可能是通过促进海马细胞增殖来抵抗神经元的萎缩和丢失来实现的。李鹂等［1］ 研究发现，氟西汀在显著改善抑郁大鼠抑郁行为的同时，增加了海马齿状回神经前体 细胞的数目，其增殖也增强，推测促进海马神经元再生可能是氟西汀治疗抑郁症的机制之一。李云峰等［5］通过慢性应激建立小鼠抑郁模型，认为氟西汀促进海马齿状回神经元再生可能是抗抑郁剂共同作用机制之一，并且可能与提高海马BDNF水平密切相关。一些临床研究的结果也提示抗抑郁药具有神经保护作用。 Santarelli等［6］
研究发现5-HT再摄取抑制剂能部分逆转认知功能障碍大鼠海马齿状回神经元增殖减少及树突萎缩，并能促进海马神经元的再生和存活。Yatte 等［7］通过高分辨率的MRI和立体定位方法测定海马容量，发现持续性接受抗抑郁药物治疗与只在发作时 接受治疗的患者相比，海马容量无显著性降低。
本研究首次以体外培养的新生SD大鼠海马神经元为模型，通过细胞形态定量分析，探讨氟西汀对海马 神经元生长的影响。Chiou等［8］通过MTT方法，发现浓度在55 μmol · L-1 以下的氟西汀可明显促进海马神经干细胞存活，在20 μmol · L-1 时达到高峰。根据Chiou等［8］ 的研究结果，本实验选择了浓度分别为1、10、20、40 μmol · L-1 的氟西汀来干预海马神经元。结果发现不同浓度的氟西汀对海马神经元形态学指标的影响是不同的，10 μmol · L-1 氟西汀组海马神经元与正常对照组相比，有突起的神经元数目增加、最长突起长度增长（ P <0.05）;40 μmol · L-1 氟西汀组海马神经元与正常对照组相比，有突起神经元数目减少（ P <0.05），最长突起长度及胞体长径无显著性差异（ P > 0.05）;1、20 μmol · L-1 氟西汀组海马神经元与正常对 照组相比，有突起神经元数目、最长突起长度及胞体长 径无显著性差异（ P >0.05）。结果表明氟西汀对海马 神经元生长的影响有浓度依赖性，浓度过低（1 μmol ·L-1 ）对海马神经元生长的作用不明显，适当浓度（10 μmol · L -1 ）可以促进海马神经元的生长发育，浓度过高（40 μmol · L-1 ）则抑制海马神经元的生长。本实验中氟西汀浓度为40 μmol · L-1即出现对海马神经元的抑制作用，与Chiou等［8］研究结果不完全一致，表明氟西汀对海马神经元和神经干细胞的影响存在差异。氟西汀促海马神经元生长的机制尚不明了，有研究［9］表明，长期给予氟西汀后，大鼠海马神经元的脑源性神经 营养因子（BDNF）mRNA表达明显高于对照组，而 BDNF 具有很强的刺激和促进神经细胞生长和分化，维持神经细胞存活和正常功能的作用，Dwivedi等［10］发 现氟西汀不仅能够增加海马BDNFmRNA的表达，还可以逆转皮质酮导致的海马BDNFmRNA表达的降低。据此可以推测，氟西汀促海马BDNF表达可能是促海马神经元生长的机制之一。非营养因子家族，包括睫状神经营养因子、胶质细胞源性神经营养因子、成纤维细胞生长因子等，都能促进海马神经元的生长，氟西汀是否也可能通过上调这些因子的表达而促进海马神经元的生长有待研究。
本实验结果提示，氟西汀可以促进新生大鼠海马神经元的生长，这为氟西汀治疗与海马损害有关的神经精神疾病提供实验基础和理论依据。氟西汀促海马神经元生长的确切机制尚待进一步探讨。
【参考文献】
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［8］Chiou S H，Chen S J，Peng C H，et al.Fluoxetine up-regu-lates expression of cellular FLICE-inhibitory protein and in-hibits LPS-induced apoptosis in hippocampus-derived neural stem cell［J］.Biochem Biophys Res Commun，2006，343（2）: 391-400.
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［10］ Dwivedi Y，Rizavi H S，Pandey，G N.Antidepressants re-verse corticosterone-mediated decrease in brain-derived neu-rotrophic factor expression:Differential regulation of specif-ic exons by antidepressants and corticosterone［J］.Neuro-science，2006，139（3）:1017-1029.
