二氮嗪对深低温脑缺血再灌注大鼠脑组织NR1表达的影响
2 结 果
2.1 各组大鼠脑组织含水量
结果见表1。3组脑组织含水量在缺血再灌注后2、6h未见明显区别，再灌注12h、1d时3组之间差异有统计学意义（P<0.01），模型组含水量明显高于二氮嗪组和假手术组，二氮嗪组高于假手术组，2d时模 型组和假手术组之间比较差异有统计学意义（ P < 0.01），二氮嗪组和假手术组间差异无统计学意义（P>0.05）。3 d和7d 3组间无统计学差异（P>0.05）。表1 3组大鼠缺血再灌注不同时间脑含水量比较（略）
2.2 脑组织NR1的表达
模型组NR1在2h开始升高，1d达到高峰后下降，7d达到正常水平。二氮嗪组变化与模型组类似，但NR1表达水平低于模型组，假手术组NR1表达水平最低，3组各时间点（除7 d外）均有统计学差异（P <0.05）。3组灰度值见表2（灰度值越高，表明NR1表 达越低）。表2 各组再灌注后NR1的表达情况比较（略）
3 讨 论
ATP依赖性钾通道（KATP）属于内向整流型钾通道，由完全不同的两个亚单位构成，即内向整流亚单 位Kir 61x（Kir611和Kir612）和磺酰脲受体（SUR）两种蛋白质构成［2］。KATP同时存在于细胞膜和线粒体膜上，是一种应激活化分子，缺氧、代谢毒物等均可将其激活，从而调节机体对外界刺激的适应性。其中线 粒体ATP依赖性钾通道（mito KATP）被认为是组织缺血、缺氧保护的共同效应器［1］ 。mito KATP的开放剂能有效地保护缺血再灌注损伤，是减轻缺血损伤和 介导缺血预适应的主要机制 ［3］。mito KATP开放剂二氮嗪原来仅被认为是一种作用于血管内膜钾通道的血管扩张剂，临床上主要用于治疗高血压。近年来mi- to KATP在脑缺血中的地位引起广泛关注，本实验研究发现，模型组脑组织含水量在12h及1d时间点明显高于二氮嗪组和假手术组，而二氮嗪组高于假手术组，2d时脑含水量模型组高于假手术组，两者之间有统计学意义（ P <0.01），二氮嗪组和假手术组间未见区别，无统计学意义。其余各时间点未见差别。这说明了二氮嗪预处理对深低温缺血再灌注大鼠具有脑保护作用。NR1是NMDAR的基本功能亚单位，NMDAR是 兴奋性神经递质谷氨酸的离子型受体，生理状态下， NMDAR的兴奋对神经系统的发育、学习、记忆起着关键作用，但是在缺血缺氧时，它却是谷氨酸神经毒性的主要通路。谷氨酸是脑内主要的兴奋性氨基酸，但是在一定条件下，也具有神经毒性。缺血缺氧时谷氨酸通过直接和间接两种途径产生兴奋毒性。目前已证实，缺血缺氧时谷氨酸的释放增加，清除减少，突触间 隙的谷氨酸浓度迅速升高，激活NMDAR，产生兴奋毒性。高国栋等［4］研究发现，二氮嗪预处理可抑制EAA的释放，NMDA受体数量的增加可能反映着与受体结合的谷氨酸和（或）转运体量的增加。Selkirk等［5］研究报道谷氨酸的过多释放和中枢神经系统的发育畸变有关，它可以使其受体过度激活并产生兴奋性毒性，谷氨酸转运体的过度表达使小鼠海马CA1区锥体细胞 的易损性增加。本试验同时检测了各组NR1的表达 水平，结果表明模型组NR1在2h开始升高，1d达到高峰后下降，7 d达到正常水平。二氮嗪组变化与模型组类似，但NR1表达水平低于模型组，假手术组NR1表达水平最低，3组各时间点（除72h外）均有统计学差异（P<0.05）。由此推断，二氮嗪发挥脑保护作用 可能是通过下调NR1的表达水平来实现，这可能是其 脑保护作用机制之一。认识到mitoKATP的存在已近10年，但有关检测这种通道在完整细胞中活性的方法最近才发展起来。 越来越多的证据表明mitoKATP的药理学特征是独特的，然而这方面的研究进展缓慢。最新研究表明，KATP通道在“缺血或缺氧预适应”所诱导的大脑自身保护机制中起关键作用［6-7］。因此，KATP通道开放剂作为脑保护剂将日趋成为研究热点［8-9］。
mitoKATP开放剂二氮嗪预处理对缺血再灌注大鼠具有脑保护作用，是一种有潜力的脑保护药物。明确其保护作用机制，可以为研制开发新型抗脑缺血药物及其二氮嗪应用于临床提供实验依据。
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