乙醇对小鼠原代肝细胞脂肪酸氧化速度的影响
2.4 肝细胞中的脂肪含量 通过油红O染色可见，肝细胞在20mmol/L乙醇存在的情况下，培养6h后，肝细胞内的中性脂肪含量明显升高，见图3。
图3 20mmol/L酒精处理6h后，肝细胞的油红O染色（40×）
Fig 3 The Oil Red O staining of hepatocytes treated 6h with 20mmol/L ethanol (×40)
A: The hepatocytes without treating with ethanol; B: The hepatocytes treated with 20mmol/L ethanol.
3 结论
随着中国经济的发展，在西方常见的酒精性肝病（alcoholic liver disease，ALD）在我国的发病率也逐年提高。酒精为肝细胞损伤的重要因素，直接损害肝细胞线粒体、胞浆、内质网结构。酒精进入肝细胞内通过脱氢酶转变成乙醛，再通过乙醛脱氢酶（主要是线粒体酶）转换为乙酸。在此过程中氧化型辅酶I（NAD）减少，而还原型辅酶I（NADH）增多，NAD/NADH比例降低，线粒体内三羧酸循环受到抑制，使肝细胞脂肪氧化作用减弱，产生活性氧(reactive oxygen species，ROS)，肝内脂肪酸合成增多超过肝脏处理能力，从而形成脂肪肝，严重者进一步发展成为酒精性肝炎和肝硬化。
乙醇在体内诱导产生“氧化应激（oxidative stress，OS）”状态，从而导致氧化还原环境的改变，一些有害活性物质的产生，金属离子的转运异常，线粒体的损害，细胞缺氧，甚至免疫系统的损害等［2～4］，在细胞内数个因素相互作用导致产生氧化应激的状态。酒精导致的肝脏损害主要由于脂质过氧化，蛋白的羧基化，脂类自由基的产生，肝脏内抗氧化物质的降低［5～7］，尤其是还原型谷胱甘肽（reduced glutathione，GSH）减少。酒精能够结合羟自由基（Hydroxyl Radical，酒精与羟自由基结合产生1-羟基乙基自由基（1-Hydroxyl Ethyl Radical，HER），肝脏的内质网能够依赖NADPH将酒精氧化生成HER［8］。这个过程包括通过细胞色素P450产生超氧化物和过氧化物，再通过金属催化产生羟自由基，如氧自由基，这些产物将与酒精相互作用产生HER［9，10］。从长期酒精喂养的大鼠分离的内质网相对于正常大鼠更容易产生HER，主要是由于酒精诱导CYP2E1的表达水平［11］。尽管如此，HER在酒精性肝病确切机制目前尚不清楚。一些研究认为，HER能够稳定的与蛋白质结合，从而改变蛋白的免疫源性，而导致了肝脏的损伤［12］。同时，慢性的酒精能够降低肝脏线粒体中GSH的水平，从而导致ALD的发生［13］。此外，酒精也能够抑制肝细胞的脂肪摄取，在高浓度酒精存在的情况下，线粒体ATP产生的水平也会明显降低。酒精还能够导致线粒体膜电位(ΔΨm)明显减低，导致线粒体膜的通透性的升高［14］。
本研究通过肝细胞体外培养，研究乙醇对肝细胞脂肪酸氧化速度和细胞中脂肪含量的影响，发现乙醇能够降低肝细胞脂肪酸的氧化速度，并使细胞中的中性脂肪含量增加。在肝脏功能研究过程中，最常使用的细胞系HepG2，其具有较完整的脂肪代谢相关的生物转化酶系统，因此被广泛的应用到各种研究过程中，甚至包括VLDL的分泌功能研究。但是，HepG2细胞中的生物酶系统的活性存在着明显的缺陷，也使其应用受到很大的限制。而分离培养原代肝细胞，其细胞内的生物酶活性更类似于正常生理状态，相关研究结果可直接指导临床治疗及进行预防干预。本研究结果发现，原代肝细胞对乙醇暴露具有很高的敏感性。本研究不仅为体外肝细胞的研究提供了研究材料，也为酒精性肝病的机制研究奠定了研究基础。
(致谢:本文经长安医院检验科主任，中华医学实践杂志常务编委齐为民同志审校，在此表示感谢。)
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