肺炎克雷伯菌β?内酰胺酶检测与相关耐药表型分析
［关键词］ 肺炎克雷伯菌；β?内酰胺酶；耐药性；呼吸科
质粒介导的超广谱β?内酰胺酶(ESBLs)的产生和传播是革兰阴性杆菌对β?内酰胺类抗生素耐药的重要原因之一［1］。肺炎克雷伯菌是最常见的产ESBLs菌株［2］，已成为医院感染的重要病原菌之一，可造成严重的医院感染暴发和院外耐药菌株的传播［3］。特别是质粒介导的ESBLs因其底物谱广、传播速度快而引起广泛关注。我们对2003年1月至2005年12月本院呼吸科分离的肺炎克雷伯菌进行了抗生素敏感度测定及对产ESBLs菌株进行了检测，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 菌株 肺炎克雷伯菌来源于2003年1月至2005年12月本院呼吸科患者送检痰标本，10天内分离出相同菌种取第1次分离株。
1.1.2 试剂 API试条、M?H琼脂(法国梅里埃公司产品)，药敏纸片：头孢噻肟、头孢他啶、头孢噻肟/棒酸、头孢他啶/棒酸购于英国Oxoid公司，其他药敏纸片购于杭州天和微生物试剂厂。
1.2 方法
1.2.1 菌种鉴定 根据《全国临床检验操作规程》操作，采用API试条和APILAB PLUS细菌鉴定系统进行细菌鉴定。
1.2.2 药敏试验 采用K?B法，结果判读按NCCLS 2002年推荐标准。
1.2.3 ESBLs检测 采用双纸片协同试验法，选取对头孢噻肟耐药或中介耐药的肺炎克雷伯菌株，按常规纸片扩散法在M?H琼脂平板上涂布受试菌，先在平板中心贴上20 μg/1 μg阿莫西林/克拉维酸纸片，尔后在其上下左右贴30 μg/片头孢曲松、头孢噻肟、头孢他啶和氨曲南纸片，其纸片中心距复合剂纸片中心30 mm或20 mm，35 ℃孵育18 h～20 h。如周围4个药敏纸片中有任何一个抑菌环在靠近复合纸片一侧的边缘出现扩大或增强，说明该菌产ESBLs。如结果可疑或协同试验阴性，但K?B药敏结果提示可能产ESBLs，则用确证试验验证，结果按美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)2002年推荐的标准判读。ESBLs阴性质控株为大肠埃希菌ATCC 25922，ESBLs阳性质控菌为ATCC 700603。
2 结果
2.1 ESBLs检出率 3年中从下呼吸道感染标本中共检出256株肺炎克雷伯菌，其中有94株产ESBLs，检出率为36.7%(94/256)，较卢小军等［4］报道的19.6%要高得多，较朱冬林等［5］报道的43.1%低。3年中呼吸科下呼吸道感染标本中产ESBLs肺炎克雷伯菌分离率，分别为33.3%(20/60)、37.5%(30/80)、37.9%(44/116)。
