仪器与纸片扩散检测耐甲氧西林葡萄球菌的方法比较评价
［关键词］ 耐甲氧西林葡萄球菌；纸片扩散法；仪器法；琼脂稀释法
耐甲氧西林葡萄球菌(Methicillin?resistant Staphylococcus，MRS)所致院内感染已成为全球范围内一个越来越严重的问题［1］，有效预防和控制其感染的关键是及时准确地检出MRS，为临床合理选择抗生素提供依据［2］，因而快捷、准确的检测方法对快速采取有效的感染控制措施和MRS感染流行病学调查十分重要。MRS的检测方法有苯唑西林纸片扩散法、肉汤稀释法、琼脂扩散法、E?test法、仪器法及PCR技术检测mecA基因等［3］，我们将临床分离的63株葡萄球菌用含4%氯化钠(NaCl) M?H平板苯唑西林纸片扩散法和VITEK?32型自动微生物鉴定仪法进行检测比较，并以含6 μg/ml苯唑西林的琼脂稀释法为标准，评价其准确性。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 菌株及其来源 自2006年1月至2006年5月从江医二附院临床患者的痰、血、尿、脓液、前列腺液及阴道分泌物等标本，经常规分离得到63 株葡萄球菌，包括凝固酶阳性葡萄球菌50 株，凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)13株。另MRS阳性参考菌株ATCC(R)43300，MRS阴性金黄色葡萄球菌ATCC25923，购自卫生部临检中心。
1.1.2 苯唑西林纸片 购自北京天坛生物制品有限公司，苯唑西林标准品购自重庆药友制药有限公司，SDS琼脂糖、溴化乙锭、溶菌酶、蛋白酶K为美国Sigma产品，丙烯酰胺、双丙烯酰胺TEMED和TBE为美国Gibcobrl公司产品。
1.1.3 仪器 法国生物梅里埃公司生产的VITEK?32型鉴定系统及配套的GPS?SV葡萄球菌药敏检测卡。
1.2 方法
1.2.1 含4% NaCl M?H平板纸片扩散法 由于苯唑西林较甲氧西林稳定、不易失活，通常用苯唑西林代替甲氧西林测定葡萄球菌。配制0.5麦氏单位菌液接种于含4% NaCl的M?H平板，贴1 μg/片苯唑西林药敏纸片，35 ℃、24 h观察结果(CNS孵育48 h)金黄色葡萄球菌(SA)抑菌圈≥13 mm为敏感，11 mm～12 mm为中介，≤10 mm为耐药，凝固酶阴性葡萄球菌≥18 mm为敏感，≤17 mm为耐药。
1.2.2 琼脂稀释法 NCCLS推荐为测定耐甲氧西林葡萄球菌的参考方法，在含4% NaCl、6 μg/ml苯唑西林M?H平板中点种0.5麦氏单位菌液，经35 ℃、24 h孵育检查琼脂表面有无细菌生长，只要有一个菌落生长即判为MRS。
1.2.3 仪器检测 挑取待检菌落，严格参照GPS?SV卡说明书配制一定浓度菌悬液，置备GPS?SV药敏卡上机，用VITEK?32型全自动微生物鉴定仪检测结果。
1.2.4 质量控制 以金黄色葡萄球菌ATCC(R)43300为MRS阳性参考菌株，金黄色葡萄球菌ATCC25923为MRS阴性参考菌株及药敏质控菌株与实验菌株同时进行检测。
