X-连锁无丙种球蛋白血症的研究进展
4 XLA的治疗研究免疫重建是采用正常细胞或基因片段植入患儿体内，使之发挥功能，以持久地纠正缺陷的基因及其表达产物。1968年使用HLA配型同种异体骨髓移植治疗2例致死性免疫缺陷病获得成功。至今已有近2000例PID患儿接受骨髓移植，总存活率为62%，其中同型合子骨髓移植达79%。无关供体配型骨髓（matched unrelated marrow donor，MUD）移植在近年已很盛行，成功率约为50%，5岁以内接受移植者可达85%［23］。近年开展脐血干细胞移植，存活率为75%。用母体骨髓CD34+干细胞宫内移植（腹腔注射）已有成功的报道［5］。将正常目的基因片段整合到患儿干细胞基因组内（基因转化），随细胞有丝分裂，转化的基因片段能在患儿体内复制而持续存在。理论上讲，凡能通过骨髓移植治愈的疾病均是基因治疗的指针［24］。基因治疗PID的尝试已经历多年，取得一定成效，但尚处于探索和临床验证阶段［25］。Faust等［26］的动物实验是通过免疫球蛋白的增强子和驱动子介导的小鼠BTK cDNA转录至两组免疫缺陷鼠（XLD或BTK-/-鼠）。转入1个拷贝的XLD或BTK-/-鼠经蛋白印迹法检测其BTK达到正常量的25%；而转录2个拷贝者其BTK达到正常量的50%。两组小鼠经检测均有正常数量的脾B细胞，两组小鼠对TNP一蔗聚糖刺激所产生抗体的反应和血清IgM、lgG3水平较正常野生鼠明显减低，但较XID小鼠有所提高。Drabek等［27］通过人类BTK cDNA与鼠主要组织相容性复合体Ⅱ区调节因子的转基因治疗，纠正了BTK缺陷鼠的B细胞功能，并发现转入的基因并不表达于前B细胞以前的分化阶段，此外它在胸腺上皮细胞、活化T细胞、单核细胞上表达，并在其他组织均有低水平表达。经蛋白印迹法检测转基因鼠的脾细胞产物发现，BTK蛋白总含量可达到与野生型鼠相同。这些研究均向我们提供了基因治疗XLA的可能性。此外，Rohrer等［28］通过动物实验证实，应用极少量正常骨髓细胞输注即可通过竞争使XID小鼠获得B系统免疫重建。这项研究推测，即使不成功的基因治疗也可对XLA患者有益，为今后开展人类XLA的基因、细胞治疗提供有利的基础和广阔的前景。总体上说，尽管目前基因治疗离成熟的临床治疗技术还有相当的距离，但经过近10年的临床试验，人们已获得了大量宝贵的临床资料。我们有理由相信，XLA的基因治疗将在不久的将来获得突破性进展。
5 展望尽管80%～90%临床诊断为XLA的病人依靠BTK突变检测确诊为XLA，但是XLA的基因突变位点很多，与临床症状的相关性不强，同一家系中的XLA病人临床表现程度很可能各不相同。即：基因型和临床表型的关系是目前需要研究的课题之一［29］。这涉及到突变基因产物蛋白质的功能、结构稳定性和二维构像［30，31］。这样，通过基因突变及其对蛋白的影响无法预知XLA的病程、复杂程度、B细胞数量和免疫球蛋白的水平。只有彻底明确BTK在B细胞信号传导中的作用机制，才能找到基因突变和临床症状的相关性，完善XLA的基因诊断，并为治疗奠定理论基础［32］。1994年，国际上成立了BTK基因突变分析小组并建立了BTK基因突变数据库（http：//www.uta.fi/imt/bioinfo/btk base/），为XLA的基因诊断提供了便利的条件。但是数据库中的病源主要来自西方国家、日本和俄罗斯，而国内的BTK基因研究相对处于空白阶段。因此，目前开展BTK基因突变的检测工作应成为国内同类研究的重点，通过建立有效可靠的BTK基因突变筛查方法，研究中国人BTK基因突变的规律。因此，随着对PID认识的深入和检测方法的简化，将会有更多的病例被确诊，不仅可以用常规方法治疗，而且可以做基因分析，同时，建立PID登记网络［33］，也将有助于了解确切的发病率和需要治疗的患者。总之，来自突变基因的BTK蛋白还没有被完全认识，在蛋白质水平这些突变的结果还不清楚。BTK基因突变在XLA发病机制中更详细作用还不清楚，但作为疾病基因，对其基因组结构的研究，将为未来的体细胞基因治疗创造条件。当然，体细胞治疗存在着一定的问题，目前还不能达到此目的，但这是今后研究的一个重要方向，基因治疗无疑是近20年来分子生物学和重组DNA技术迅速发展的一种结果。由于体内大剂量静脉丙种球蛋白的长期替代疗法有不少的副作用，且价格昂贵，不能根本解决问题。若能将缺陷的基因进行原位的修补，基因治疗将是最理想的根治方法。
【参考文献】
1 Lebien TW.Fates of human B- cell precursors.B1ood，2000，96（1）：9-23.
2 Minegishi Y，Coustarn-Smith E，Rapalus L，et al.Mutations in Ig（CD79a） result in a complete block in B-cell development.Journal of Clinical Investigation，1999，104（8）：1115-1121.
3 Wang Y，Kanegane H，Sanal O，et al.Novel Ig（ CD79a） gene mutation ina Turkish patient with B cell-deficient agammaglobulinemia.Ameri-can Journal of Medical Genetics，2002，108（4）：333-336.
4 Mlili M，Antunes H，Blanco-Betancourt C，et al.A neecessive agammaglobulinemia with impaired pre-B cell differentiation due to a large deletion of the IGH locus.European Journal of Pediatrics，2002，161（9）：479-484.
5 Chapel H，Geha R，Rosen F.Primary immunodeficiency diseases： an update.Clin Exp Immunol，2003，132：9-15CDC.
6 Vihinen M，Kwan SP，Lester T，et al.Mutations of the human BTK gene coding for Bruton tyrosine kinase in X -linked agammaglobulinemia.Human mutation，1999，13（4）：280-285.
7 Mao C，Zhou M，Uckun FM.Crystal Structure of Bruton’s tyrosine kinase domain suggests a novel pathway fox activation and provides insights into the molecular basis of X -linked agammaglobulinemia.Journal of Biological Chemistry，2001，276（44）：41435-41443.
8 孙金英，刘乐宇，刘桂兰.X连锁无丙种球蛋白血症的分子生物学研究进展.国外医学·儿科学分册，2001，28（4）：191-194.
9 王剑利，耿松海.BTK基因与XLA.国外医学·遗传学分册，2000，23（5）：263-266.
10 Vihinen M，Brooimans RA，Kwan SP，et al.Immunol Today，1996，17（1）：502-506.
11 Vihinen M，Cooper MD，De Saint Basile G，et al.Immunol Today，1995，16（1）：460-465.
12 Tan JE-L，Wong S- C，Gan SK-E，et al.The adaptor protein BLNK is required for B cell antigen receptor induced activation of nuclear factor band cell cycle entry and survival of B lymphocytes.The Journal of Siological Chemistry.The Journal of Biological the Mistry，2001，276（23）：20055-20063.
13 Moha med，Nore，Christensson，et al.Signaling of Bruton’ s tyrosine kinase，Btk.Scandinavian Journal of Immunology，1999，49（2）：113.
14 Brunner C，Avots A，Kreth HW，et al.Bruton’ s tyrosine kinase is activated upon CD40 stimulation in human B lymphocytes.Immunobiology，2002，206（4）：432-440.
15 Mizuno T，Rothstein TL.Cutting edge：CD40 engagement eliminates the need for Bruton’ s tyrosine kinase in B cell receptor signaling fox NF—B.Journal of Immunology，2003，170（6）：2806-2810.
16 Brunner C，Kreth HW，Ochs HD，et al.Unimpaired activation of c-Jun NH2-terminal kinase（JNK） 1 upon CD40 stimulation in B cells of patients with X—linked agammaglobulinemia.Journal of Clinical Immumology，2002，22（4）：244-251.
17 Koyasu S.Beating a kinase.Nature Immunology，2001，2（10）：897-898.
18 Liu W，Quinto I，Chen X，et al.Direct inhibition of Bruton’ s tyrosine kinase by IBtk，a Btk binding protein.Nature Immunology，2001，2（10）：939-946.
19 黄海.Btk与XLA相关性研究进展.国外医学·儿科学分册，1998，25（5）：248-251.
20 Lovering RC，Sweatman A，Genet SA，et al.Hum Genet，1994，94（1）：77-79.
21 Schuster V，Seidenspinner S，Kreth HW，et al.Am J Med Genet，1996，63（1）：318-322.
22 Hagamann TL，Chen Y，Rosen FS，et al.Am J Mod Genet，1995，59（2）：188-192.
23 Antoine C，Muller S，Cant A，et al.Long-term survival and transplantation of haemopoietic stem cells for immunodeficiencies：report of the European experience 1968一99.Lancet，2003，361：553-560.
24 Hacein-Bey-Abina S，Le Deist F，Carlier F，et al.Sustained correction of X-linked severe combined immunodeficiency by ex vivo gene therapy.N Engl J Med，2002，346：1185-1193.
25 Hacein-Bey-Abina S，Von Kalle C，Schmidt M，et al.A serious adverse event after successful gene therapy for X-linked severe combined immunodeficiency.N Engl J Med，2003，348：255-256.
26 Satterthwaite AB，Cheroutre H，Khan WN，et al.Btk dosage determines sensitivity to B cell antigen receptor cross一linking.Proc Natl Acad Sci USA，1997，94（24）：13152-13157.
27 Drabek D，Raguz S，De Wit TP，et al.Correction of the X-linked immunodeficiency phenotype by transgenic expression of human Becton tyrosine kinase under the control of the loss Ⅱmajor histocompatibility complex Ea locus control region.Proc Natl Acid Sci USA，1997，94（2）：610-615.
28 Rohrer J，Conley ME.Correction of X一linked immunodeficient mice by competitive reconstitution with limiting numbers of normal bone marrow cells.Blood，1999.94（10）：3358-3365.
29 杨锡强.原发性免疫缺陷病的历史、现状和展望.中华儿科杂志，2004，42（8）：561-563.
30 冯雷.免疫缺陷病.北京：人民卫生出版社，1988，184-217.
31 Applying public health strategies to primary immunodeficiency diseases： a potential approach to geneticdisorders.2004，6.1st available from：URL：http：//www.cdc.gov/genomics/ info/conference/PIsynop.htm.
32 张宁，宋淑嫒.X—连锁无丙种球蛋白血症研究现状与展望.国外医学·免疫学分册，2004，27（1）：59-62.
33 杨锡强.原发性免疫缺陷病的协作网和登记工作.中华儿科杂志，1999，37（6）： 328-329.
