术后护理对Allen?s打击法制备SD大鼠SCI模型的影响
【摘要】 目的：探究术后护理对Allen’s打击法制备SD大鼠SCI模型的影响。方法：40只SD大鼠随机分为普通饲养组（A组）与饲养护理组（B组），每组20只。两组均使用Allen’s打击法制备SCI大鼠模型，分别实施相应护理4周，观察其并发症的情况，并记录每组大鼠死亡数量与时间。结果：模型制备前1 d分别与模型制备后1、7、14、28 d大鼠的BBB评分比较，两组组内比较差异均有统计学意义（P<0.05）。B组模型死亡情况与并发症出现情况明显较A组减少。A组死亡时间多分布在7 d左右，B组死亡时间无明显密集区。A组大鼠死亡率为80%，B组死亡率为30%。结论：大鼠SCI模型制备成功，有效的术后护理能够明显降低模型大鼠的死亡率，并延缓死亡时间，提高实验模型样本量。
中图分类号 R47 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2015）31-0153-03
【Abstract】 Objective：To explore the effect of post-operative care on Allen’s SCI model of SD rats.Method：40 SD rats were randomly divided into general feeding group（A group） and nursing group（B group），20 rats in each group.Two groups used Allen’s method for the preparation of SCI rat model，the implementation of corresponding nursing for 4 weeks，the complications were observed，and each rat quantity and time of death also were recorded.Result：The BBB score of 1，7，14，28 d after operation were compared with before preparation operation，there were significant differences between two groups（P<0.05）.The mortality and complications of B group were significantly decreased compared with A group.The death time death of A group were distributed around 7 d，B group was no significant death-intensive areas.The rats mortality rate of A group was 80%，B group was 30%.Conclusion：The rat model of SCI is successfully prepared，and effective nursing can significantly reduce the mortality of rats，and prolong the survival time，improve the experimental sample size model.
【Key words】 Spinal cord injury； Allen’s weight dropping； Cause of death； Survival
First-author’s address：Hunan University of Traditional Chinese Medicine，Changsha 410007，China
doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2015.31.076
脊髓损伤（spinal cord injury，SCI）所造成的截瘫等严重功能障碍给患者本人、社会和家庭带来了巨大的经济损失与负担，也是临床上常见的治疗比较棘手的骨科创伤疾患。临床相似性、可调控性和可重复性常作为理想的SCI动物模型的标准[1]。建立标准的动物SCI模型成为了研究脊髓损伤的前提基础，因Allen’s[2]打击法模型制作过程与临床发病过程相似度较高，所以被广泛应用于挫伤型SCI的动物实验[3]。而制备后使其长时间的存活，保持模型的稳定性，提高模型样本量成为实验顺利开展的前提基础。为了使SCI模型具有较好的稳定性，本实验应用Allen’s打击法制备大鼠动物SCI模型，两组给予不同的术后护理，观察两组大鼠死亡率和并发症，分析有效的护理对造模后大鼠的作用，并分析大鼠的死亡原因，为后期治疗SCI提供前提条件及实验数据，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 实验动物与分组
1.1.1 实验动物 清洁级成年SD大鼠40只，雌雄不限，体重（200±20）g，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供[生产许可证：SCXK（鄂）2010-0007]。
1.1.2 实验分组与SCI模型的建立 40只大鼠，随机分成两组（A组普通饲养组和B组饲养护理组），每组20只，适应性喂养1周后准备造模。用Allen’s法（10 g重物5 cm高度垂直打击）建立挫伤型SCI大鼠模型。以T10棘突为中心切开背部正中T9～11棘突部皮肤，刀柄分离棘突两侧肌肉，暴露棘突及椎弓板，咬骨钳咬除棘突及椎板，暴露脊髓，用Allen’s打击器对准T10节段脊髓垂直打击，打击高度5 cm，重量10 g，直径2 mm，打击成功可见大鼠尾巴出现痉挛性摆动，双下肢躯体回缩样扑动，呈迟缓性瘫痪。 1.2 饲养及术后护理方法
1.2.1 A组 本组内大鼠术后每只动物肌肉注射青霉素16万U/d，连续1周。每日定量供应充足饲料和水，在安静、通风、清洁环境下分笼饲养，辅助排尿，每日一次更换鼠笼内垫料，保持鼠笼内干燥、清洁。
1.2.2 B组 本组内大鼠除以上普通饲养外并加强以下护理：（1）红外线照射：术后创口红外线照射治疗，2次/d，1 h/次；（2）辅助排尿：大鼠每日辅助排尿至少2次，早晚各一次，排尿时，左手撑起大鼠腹部，右手触摸找到充盈的膀胱，按出膀胱底部，自上而下轻柔挤压，逼迫尿液排出，注意轻柔，避免过力导致膀胱破裂，尿道阻塞者性膀胱穿刺（10 ml注射器针头穿刺膀胱抽出潴留尿液）；（3）辅助运动：大鼠每日辅助运动1次，每次半小时。辅助运动时，先予大鼠腹部按摩2～3 min，后将大鼠置于斜坡栏上，一手将大鼠尾巴拎高过大鼠头部，促使其爬坡，增强运动；（4）防止褥疮：挤压膀胱排尿后，及时清理会阴或包皮，使其保持干燥，每日检查2次大鼠，若肢体有被尿液浸湿及时用温肥皂水清洗，并用电吹风吹干。
1.3 观察指标
1.3.1 BBB功能评分 在模型制备手术前1 d及术后1 d、术后1周、2周、4周行BBB评分[4]用以评价术后运动功能。采用双人双盲法。取2个测评均值作为每次记录值。
1.3.2 模型情况 （1）模型存在的并发症情况：模型制备后开始至术后4周期间，记录大鼠存在的并发症情况；（2）模型死亡时间：模型制备后开始记录各组内死亡大鼠的死亡时间，至术后4周为止。
1.4 统计学处理
采用SPSS 17.0统计软件对所得数据进行统计处理，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，若不满足正态性及方差齐性采用秩和检验；计数资料比较采用字2检验。P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 模型发生并发症情况
造模后，大鼠均为双下肢瘫痪，无活动，损伤平面以下肌张力降低，对针刺无明显反应；术后1周，大鼠活动少，进食饮水减少，尿潴留现象普遍存在，伴有血尿、脓尿、脓血尿及腹部胀气，大便困难，少数出现尿失禁，存在肢体自噬、伤口感染、褥疮、慢性消耗性死亡等并发症，也有不明原因的突然死亡，详见表1。
2.2 BBB评分评价
造模4周后共获得18只模型大鼠的完整BBB评分数据，A组与B组大鼠BBB评分比较，差异无统计学意义（P>0.05）。造模后1、2、4周各组大鼠的BBB评分组内比较差异均无统计学意义（P>0.05），模型制备前1 d分别与模型制备后1 d、1周、2周、4周各组大鼠的BBB评分组内比较差异均有统计学意义（P<0.05），模型制备后1 d分别与1、2、4 d各组大鼠的BBB评分组内比较差异均有统计学意义（P<0.05）。详见表2。
2.3 两组大鼠死亡时间比较
大鼠SCI模型制备后，A组大鼠共死亡16只，存活4只；B组大鼠共死亡6只，存活14只；A组大鼠总死亡数较B组多，且A组死亡时间在在一周左右出现密集区，B组死亡时间无明显密集区。A组大鼠死亡率为80%，B组大鼠死亡率为30%，A组大鼠死亡率明显高于B组，两组比较差异有统计学意义（P<0.05），详见表3。
3 讨论
动物模型的科学性和稳定性是评价治疗措施的重要前提条件，本实验运用Allen’s打击法制备SCI大鼠动物模型，其制作过程简单且与临床SCI的还原度相对较高，具有一定的科学性[5-6]，BBB评分法为目前公认较为准确、可靠的运动功能评价手段[7]。各组模型在造模前及造模后的评分组内比较差异有统计学意义（P<0.05），表明SCI打击有效。B组经过加强护理饲养，模型剔除数量明显减少，差异有统计学意义（P<0.05），表明加强饲养护理有助于维持模型稳定性，防止模型丢失率。死亡时间情况统计表显示加强护理组未见明显死亡时间密集区，A组在造模后1周出现明显死亡时间密集区。全部存活下来且能在实验周期内持续获取观察指标的实验动物，从运动行为学角度，可以认为SCI模型造模成功且稳定。
有关文献研究表明SCI实验动物模型1周内的失死亡率可高达50%～70%[8-9]。本研究结果提示，可以通过以下相应措施保持SCI模型的稳定性，减少模型大鼠并发症和死亡率：用于SCI的实验动物应选用体质较好，耐手术能力强的大鼠为实验动物；造模时规范手术方案及手术时间，减少因手术创伤引起的死亡；因泌尿系统破坏是导致SCI模型丢失的最主要原因，所以着重注意治疗尿路系统疾病，适量使用抗生素并定期予以更换种类，人工辅助排尿手法柔和适中，定时适度排尿，切忌粗暴过力，以免尿道水肿及外生殖器水肿外翻，保持外阴及肢体干洁，控制饲养密度，大鼠体型虽小，但因大鼠厮打自噬它噬情况不在少数，所以笔者认为若条件允许尽量实行单笼饲养，尽可能的减少标本丢失，增强下肢及腹部被动运动，保持大便通畅，也可减少下肢水肿及褥疮引起的模型丢失。提高模型成型质量、保证模型存活数量、保持模型稳定性对实验的成功至关重要。因此要从取材、建模、护理、饲养方面详细计划和保证实施质量，才能为实验的后期研究提供前提条件。
综上所述，本实验展示并陈述了SCI模型造模过程中可能出现的一系列模型丢失情况，以及运用相应饲养护理措施得以保持SCI模型的稳定性，增加样本量，为进行SCI机制的相关实验研究及治疗创造了条件。
