榄香烯联合生物大分子合成抑制剂对Hca-F肝癌的作用
表2 榄香烯联合THP处理对Hca-F细胞周期与凋亡的影响
2.3 榄香烯联合THP处理对Hca-F细胞形态学的影响 见图2。图2可示：当榄香烯与THP联合处理的肿瘤细胞形态发生了明显的变化，细胞核染色质浓缩，核缩小，细胞肿胀破裂，细胞完整性受到明显破坏，而单纯用THP处理的30min内大多数没有明显改变，受损细胞形态学变化不典型，偶可见到凋亡、坏死的细胞，但比率并不高。图1 A： 对照组；B： 榄香烯50μg/ml；C： THP 10μmol/ml；
D： 榄香烯50μg/ml联合THP10μmol/ml对Hca-F细胞周期影响的流式细胞仪分析结果
图1 流式细胞仪分析结果
A：THP 10μmol/ml；B：榄香烯50μg/ml联合THP10μmol/ml；
C： 对照组；D： 榄香烯50μg/ml
图2 榄香烯联合THP处理对后Hca-F细胞的形态学改变
3 讨论
大连医科大学病理生理学教研室和肿瘤生物治疗研究所从20世纪70年代起就开展了莪术油、榄香烯抗癌作用的机理研究［3～5］。结果表明榄香烯处理能诱导肿瘤细胞坏死、凋亡，增强肿瘤细胞的免疫原性。为了阐明后者与榄香烯诱导肿瘤细胞膜热休克蛋白（heat shock protein，HSP）表达之间的关系［7］，我们采用流式细胞术（FCM）、免疫组化、RT－PCR以及基因芯片等技术进行了较深入的研究，结果表明，榄香烯处理能增强肿瘤细胞膜HSP70的表达，但不增强HSP70基因的转录，提示这仅仅涉及HSP分布的改变。为较准确展现可能与榄香烯抗癌作用有直接关系的基因表达变化，我们用榄香烯（浓度为50μg /ml，作用时间1h） 处理人肝癌细胞HepG2，用表达谱基因芯片（Affymetrix， Human Genome， U95A Part#， 510448， Lot# 9913250-9913251，U.S.A.，其上有12550条寡聚核苷酸）技术研究了榄香烯处理引起基因表达谱的变化并与未经榄香烯处理的和热休克的HepG2细胞对比，有34条基因表达发生变化，19条基因变化是榄香烯特异的，如肝特异转录因子HNF-6转录增加，肝再生因子（LRF）的基因表达下降，细胞周期调控因子CDC25Hu2的基因表达降低，凋亡相关分子BBC3、TRIP 的基因表达下降等，采用RT-PCR方法验证了BBC3和TRIP基因的变化［6］。
本实验在上述研究工作的基础上研究了榄香烯联合生物大分子合成的抑制剂对Hca-F的增殖、存活、凋亡、细胞周期及形态学改变的影响。结果表明本实验所用三种生物大分子合成抑制剂都不能阻断榄香烯的抗瘤作用。THP可嵌入DNA双链中，抑制DNA聚合酶的活性，从而抑制DNA的复制与转录。拓扑替康能够抑制拓扑异构酶，从而抑制DNA复制。两药都不能阻断榄香烯的抗瘤作用。放线菌酮是真核细胞蛋白质合成的抑制剂，能特异阻断蛋白质的合成，许多实验常用放线菌酮预处理观察药物作用及细胞代谢、功能、凋亡等过程对新的蛋白质生物合成的依赖性［7］。放线菌酮预处理并不能阻断榄香烯对Hca-F细胞增殖的抑制作用，表明榄香烯抗肿瘤作用对新的蛋白质表达依赖性较低。结合榄香烯处理后瘤细胞形态学的变化，提示榄香烯作用于肿瘤细胞膜或细胞中的某些蛋白质（如酶）等直接杀伤肿瘤靶细胞。由于榄香烯分子小，抗癌作用比较独特，尤其是不与其他抗癌药有交叉耐药性，与其他抗癌药联合应用是值得探讨的问题。本实验结果表明榄香烯和拓扑替康、THP合用可使其抗癌作用增强，这对榄香烯联合其他药物治疗肿瘤可能有一定参考意义。
【参考文献】
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7 Liu TX，Zhang JW， Tao J，et al. Gene expression networks underlying retinoic acid-induced differentiation of acute promyelocytic leukemia cells. Blood， 2000，96(4)：1496-1504.
