高效液相色谱法测定普卢利沙星片的含量和有关物质
作者:王琦，李志峰，徐艳丽，裴月湖
【摘要】 目的 采用高效液相色谱法建立普卢利沙星片有关物质检查及其含量测定方法。方法 Diamonsil-C18柱（4.6mm×200mm， 5μm），以0.01mol／L三乙胺的水溶液（用磷酸调节pH为2.8）-乙腈（73：27）为流动相；检测波长278nm；流速1.0ml／min；柱温30℃；进样量10μl。结果 制剂中辅料对主药测定无干扰，普卢利沙星与有关物质完全分离。在10.0～200.0μg/ml范围内峰面积与浓度呈良好的线性关系。精密度（RSD=0.13%）良好。平均回收率为99.6%。结论 本方法简便，迅速，准确，专属性强。
【关键词】 普卢利沙星；片剂；高效液相色谱法；含量测定；有关物质
Determination of prulifloxacin and its related substances in tablets by HPLC
【Abstract】 Objective To establish an HPLC-UV method for the determination of prulifloxacin and its related substances in tablets. Methods Diamonsil-C18 column (4.6mm×200mm， 5μm) was used. The mobile phase is consisted of 0.01mol／L triethylamine (pH was adjusted to 2.8 using phosphoric acid)-acetonitrile (73∶27). The flow rate was 1.0 ml／min with UV detection at 278nm. The column temperature was 30℃. The injection volume was 10μl.Results The linear range for the content of prulifloxacin was 10.0～200.0μg/ml (r=0.9999 3，n=5). The recoveries of prulifloxacin tablets were 99.6%，and its RSDs were 0.14 %.Conclusion The method is sample， efficient，accurate and specific.
【Key words】 prulifoxacin； tablets； HPLC；content determination； related substances
普卢利沙星是新的广谱氟喹诺酮抗菌药NM-394 的前体药物，可改善口服后的胃肠吸收程度。本品对革兰阴性菌和阳性菌均有效，特别是对绿脓杆菌、沙雷氏菌、肠杆菌属等革兰阴性菌具有较强的抗菌力，尤其是对绿脓杆菌的抗菌活性优于其他所有同类药物，也超过目前上市的其他抗生素药物。本品毒副作用小，口服吸收好，反复给药在体内无蓄积性。有文献报道其原料和胶囊含量的高效液相测定方法［1］，采用其方法测定本品其分离及峰形均不理想，遂在其基础上略加调整制定本法，本文采用高效液相色谱法测定普卢利沙星片剂的含量及其有关物质，方法专属性强，灵敏度高，重复性好。
1 仪器、试药与实验样品
高效液相色谱仪(HITACHI UV-VIS Detector L-7420，Pump L-7110)；普卢利沙星对照品（纯度：99.6%，归一化法），普卢利沙星片剂：132.1mg（批号：20050801、20050802、20050803，自制 ）；乙腈为色谱纯，磷酸和三乙胺为分析纯，水为二次蒸馏水。
2 实验方法
2.1 色谱条件 色谱柱：Diamonsil-C18 (4.6mm×200mm， 5μm)；流动相：0.01 mol/L三乙胺的水溶液（用磷酸调节pH为2.8）-乙腈（73：27）；流速1.0 ml/min；检测波长278nm；柱温30℃；进样量10μl。
2.2 系统适用性实验 取流动相10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。取处方量辅料适量和普卢利沙星片，按“2.9”项下操作，记录色谱图。另取普卢利沙星对照品适量，精密称定，用流动相配成浓度约为100μg/ml的溶液，取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。取普卢利沙星适量，分别进行酸、碱、高温（热）、光照破坏处理后，各进样10μl，色谱图见图1。实验结果表明，在“2.1”项的色谱条件下，流动相、辅料对测定无干扰，普卢利沙星经酸、碱、高温、光照破坏后，均有明显的分解产物峰，但分解产物均与主峰有良好的分离度，不影响测定。色谱柱理论塔板数按普卢利沙星计算不得少于5000。
图1 普卢利沙星HPLC图
A-空白溶液；B-对照品溶液；C-片剂溶液；D-碱破坏；E-酸破坏；F-高热破坏；G-光照破坏；1-普卢利沙星
2.3 线性实验 精密量取对照品约25mg，置25ml棕色量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。分别精密量取贮备液适量，以乙腈分别稀释至浓度为10.0、20.0、40.0、80.0、120.0、160.0、200.0μg/ml的溶液，各取10μl进样，记录色谱图，以浓度（C，μg/ml）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标进行线性回归，得回归方程：A=21549C+191，r=0.9999，可见在普卢利沙星10.0～200.0μg/ml范围内线性良好。
