高效液相色谱法测定普卢利沙星片的含量和有关物质
出处：论文网
时间：2006-11-16
2.4 精密度实验 配制浓度约为100μg/ml的普卢利沙星对照品溶液，进样10μl，连续进样6次，记录峰面积，RSD为0.14%。
2.5 重现性实验 取20050801批样品，按“2.9”项下操作平行测定6次，计算其含量分别为标示量的100.2%、100.2%、100.1%、100.1%、100.0%、99.9%，平均值为100.1%，RSD为0.13%。
2.6 稳定性实验 按“2.9”项下方法，取供试品溶液一份，于室温下放置，每隔1h进样1次，连续进样6h，进样量为10μl，记录峰面积，RSD=0.66%，说明样品溶液在6h内较稳定。
2.7 回收率实验 按处方，取高（120%）、中（100%）、低（80%）三种量的普卢利沙星对照品，分别加入处方量的辅料于同一100ml棕色量瓶中，加乙腈适量溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密取溶液10μl进样，记录峰面积，并计算回收率，每个浓度测定3份，结果分别为98.5％、99.7％、101.6％，RSD分别为0.83%、0.89%、0.63%（n=3）。
2.8 最低检测限 在选定的色谱条件下，按信噪比为3对最低检测限进行测定，结果表明，最小检出量0.05μg/ml。
2.9 含量测定 取普卢利沙星对照品约10mg，精密称定，置100ml棕色量瓶中，乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。取本品适量(约相当于普卢利沙星10mg)，精密称定，置100ml棕色量瓶中，用乙腈溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密吸取对照溶液和供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，按外标法以峰面积计算，即得。3批样品的含量分别为标示量的99.7%、100.3%、100.0%。
2.10 有关物质测定 取本品适量，加流动相稀释成每1ml中约含500.0μg的溶液作为供试品溶液。取供试品溶液加流动相稀释成每1ml中约含5.0μg的溶液作为对照溶液。精密吸取对照溶液10μl注入高效液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰高约为满量程的20%。精密吸取供试品溶液10μl注入高效液相色谱仪， 记录色谱图（图2）至主成分峰保留时间的2.5倍，用峰面积归一化法计算杂质含量［2］。供试品溶液中各杂质峰面积之和不得大于对照溶液主峰面积的1.0%。用自身对照法［2］计算三批样品杂质峰面积总和分别为0.36%、0.36%、0.33%。
图2 普卢利沙星有关物质HPLC图
3 讨论
3.1 检测波长的选择 对各辅料和普卢利沙星分别在200～400nm波长处进行紫外扫描，结果发现，普卢利沙星在波长为278nm处有最大紫外吸收，而在此波长下辅料没有吸收，不会干扰测定，所以波长选择278nm。
3.2 流动相的选择 由于普卢利沙星具有酸性，单独用乙腈-水作流动相时色谱峰拖尾严重、峰形不好、分离效果差。加入0.01mol/L三乙胺并用磷酸调节pH值2.8后，得到明显改善。本法能有效地控制普卢利沙星片剂的质量，其精密度高、重复性好、快速简便、结果准确可靠。
【参考文献】
1 封宇飞.HPLC法测定普卢利沙星胶囊的含量和有关物质.中国药学杂志，2006，41（4）∶308.
2 国家药典委员会编．中国药典.二部.北京：化学工业出版社，2005，124.
