胆囊良恶性肿瘤中P16蛋白表达及临床意义
P16基因是Serrano［5］、Kamb［6］首次报道的一种新型肿瘤抑癌基因，其完整编码序列包括2个内含子（intron1和intron2）和3个外显子，其中5′端126bp区域为外显子1（exon1）中间307bp为外显子2（exon2）,3端11bp区域为外显子3（exon3）［5］。P16抑癌基因由3个外显子组成，编码为156个氨基酸，其作用越来越受人们的重视，它与多种恶性肿瘤的发生、发展有关，故称为多重肿瘤抑制基因（MTS1），已被国际基因组织命名为（DKN2）基因［6，7］。Kamb等研究发现人类的多种肿瘤及其转化细胞系均存在较高频率的P16基因缺失。有研究报道［8］，把野生型P16基因转换给P16基因缺失的肿瘤细胞系时肿瘤生长明显受抑。另外，大量文献报道P16在G1期与Cyclin D、CDK4或CDK6以及PRB共同形成反馈环调节细胞周期的运转。CDK4或CDK6与Cyclin D结合而被激活继而磷酸化PRB，从而激活转录因子E2F促使S期特殊的基因表达［9］。P16与Cyclin 竞争结合CDK4和CDK6，抑制CDK4和CDK6的活化，使细胞停滞于G1期［10］，从而抑制细胞增生和恶性转化。当P16基因缺乏或突变而不能正常表达时，细胞则失去控制发生癌变［5］。这种抑癌基因的突变或缺乏，并且广泛存在于各种消化系肿瘤中，在食管癌、胃癌、胰腺癌等肿瘤中都检测到P16基因的高频突变及缺乏［11，12］，在原发性胆管癌中发现P16基因突变为63%，突变率较P53（1/16）和Kras基因（1/25）高［13］。提示在消化系肿瘤的发生、发展中P16基因的纯合子缺失比基因突变发挥了更重要的作用［11，12］。
实验结果显示，P16蛋白的表达主要位于胆道系统及其肿瘤细胞核和细胞浆，少部分发现仅有细胞浆着色而核未着色，这与P16蛋白在食管癌、胃癌、胰腺癌细胞着色情况相一致。本组的胆囊腺瘤和胆囊正常黏膜组中P16蛋白均有较高的阳性率，而二者间的P16蛋白阳性率比较差异无显著性。在胆囊癌组中S1～S2期的P16蛋白表达无明显下降，直至S4～S5期方明显下降。由此提示P16基因突变与失活，并不是发生于胆囊癌的早期。而是发生在胆囊癌的中晚期。在胆囊癌组中P16蛋白的阳性率明显低于胆囊腺瘤与正常黏膜组的阳性率（P＜0.05）。发生在胆囊外转移，例如肝转移时的S4～S5期P16蛋白阳性表达率低于未发生转移的S1～S2期及良性病变黏膜组，统计学上差异均有显著（P＜0.05），表明P16蛋白的低表达与胆囊癌的发生和发展密切相关。说明P16基因的失活是胆囊癌细胞因失控而加速，尤其在肿瘤发生晚期的这种机制更明显，故P16基因可为肿瘤进展的重要指标之一。结果还显示，在低分化胆囊癌组P16蛋白表达显著低于高、中分化癌组（P＜0.05），提示了P16阳性表达与胆囊癌的恶性程度及分化相关，可作为胆囊癌的预后判断指标之一。
P16基因在许多肿瘤研究中已得到证实。国外研究报道显示：P16基因突变可能与Nsclc病例的临床分期有关。国内有报道：P16基因突变与Nsclc的发生发展可能有一定的关系，且与发生在晚期及转移有关［1］。显然对胆囊癌中P16基因蛋白的表达，可为临床诊断及预后判断提供一个有效手段的指标依据。
【参考文献】
1 王继旺.非小细胞肺癌P16基因突变的初步研究.中国肿瘤杂志，1999,7：546-547.
2 高学硕.P16蛋白在乳腺癌中表达状况及生物学意义.实用肿瘤杂志，2000，15（2）：93-95.
3 Nerin J,Moran TJ,Kays,et al.Carcinoma of the gallbladder. Staging treatment and prognosis. Cancer,1976,37(2):141.
4 回允中译.阿克曼外科病理学.第八版.沈阳：辽宁教育出版社，1999，959.
5 Serrano M,Hannon GT,Beach D.A new regulatory motitin cell cycle control causing specific inhibtion of cyclin D/CDK4.Nature,1993,366:704-707.
6 Kamb A,Cruis NA,Wearer-Feldllaus J,et al.A cell cycle regulator potentially involved in genesis of many tumor types.Science,1994,264:436-438.
7 Arap W,Niishi Kaua R,Fumari FB,et al.Replacement of the p16/CDKN2 gene suppresses human cell growth.Cancer Res,1995,55:1351.
8 Nishikawa R,Furnari FB,Lin H,et al. Loss of p16 INR4 expression is frequent in high grade gliomas.Cancer Res,1995,55:1941-1945.
9 Kamb A.Cell-cycle regulators and cancer.Trends Genet,1995,11:136-140.
10 Xiong Y,Zhang H,Beach D.Subunit rearrangement of the cyclin-dependent kinases is associated with cellular transformation.Genes DeN,1993,7:1572-1583.
11 吕有勇.多基因变异与胃黏膜细胞癌变的关系.中华消化杂志，1996，16：9-13.
12 吕有勇，高崇峰，崔建涛，等.胃癌中MTS1/P16基因缺乏及表达异常的研究.中华肿瘤杂志，1996，18：189-191.
13 Majima T. Cancer Lett,1997,118(1):47-53.
